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酸奶飲料中低聚木糖的測(cè)定

原理:酸奶飲料中蔗糖、乳糖及添加劑干擾低聚木糖組分的分離,為了更準(zhǔn)確地測(cè)定酸奶中低聚木糖的含量,將酸奶飲料用氫氧化銅沉降蛋白、脂肪,再用60%乙醇水溶液沉降去除大分子多糖及高聚合度低聚糖,而后進(jìn)行硫酸水解,低聚木糖組分水解變?yōu)槟咎恰K崮田嬃现械途勰咎呛浚ǎ?,以木糖?jì))即為酸奶飲料中水解前后木糖含量的差值。

步驟:1.試劑:

4mol/L硫酸:98%硫酸用水稀釋而成,需標(biāo)定較準(zhǔn)確濃度;

45%氫氧化鈉:取22.5g氫氧化鈉,加入50ml水溶解即可;

4%氫氧化鈉:取8.0g氫氧化鈉,加入200ml水溶解即可;

7%硫酸銅:取35.0g硫酸銅結(jié)晶,加入500ml水溶解即可。無(wú)水乙醇(AR)、乙腈(色譜級(jí))。

2.儀器及色譜條件:

儀器:高壓液相系統(tǒng):515高壓泵、U6K進(jìn)樣閥、柱溫箱、2414示差折光檢測(cè)器、色譜工作站,真空泵或電吹風(fēng)。

色譜條件:色譜柱:鍵合氨基柱(nova-pak250×3.9mmidsteel,4μm);

流動(dòng)相:乙腈∶水(75∶25v/v);流速:1.0ml/min;柱溫:35℃;示差檢測(cè)器溫度:35℃。3.樣品預(yù)處理:

取10.0ml酸奶飲料,加入水20ml,搖勻,加入7%硫酸銅,4%氫氧化鈉4.0ml,加水定容100ml,搖勻;

濾紙過(guò)濾,取濾液50.0ml,濃縮至10.0ml,加入無(wú)水乙醇12.0ml,沉降聚合度高的低聚糖;

用0.45μm膜過(guò)濾,用電吹風(fēng)(大于50℃)吹趕盡乙醇,用水溶解定容至10.0ml(該溶液為樣品水解前上機(jī)測(cè)定溶液M1);

取9.0ml于水解管中,加入4mol/mlH2SO41.62ml,搖勻,于100℃水解1小時(shí),冷卻;

用45%NaOH中和(pH值5~6),加入少量活性炭粉脫色,冷卻;

濾紙過(guò)濾,取清液3.0ml,加入12.0ml無(wú)水乙醇,搖勻;

當(dāng)有Na2SO4析出時(shí),用0.45μm水相膜過(guò)濾,取濾液10.0ml,電吹風(fēng)吹干;

加水溶解,定容1.0ml,用0.45μm水相膜過(guò)濾(該溶液為樣品水解后上機(jī)測(cè)定溶液M2),上機(jī)測(cè)定。4.總稀釋體積:V(ml)=100×10/50×(9.0+1.62+1.44)/9.0×(3.0+12.0)/3.0/10.0×1.00=13.4ml。

5.計(jì)算:以木糖為標(biāo)樣,外標(biāo)單點(diǎn)校正。

Mi(g/100ml,以木糖計(jì))=Aspl/Astd×Cstd×V×10-3/W×100低聚木糖含量X(%,以木糖計(jì))=M2-M1M2:酸奶飲料水解后低聚木糖含量(%);M1:酸奶飲料水解前低聚木糖含量(%);

Aspl:樣品中木糖組分峰面積;

Astd:標(biāo)樣木糖組分峰面積;

Cstd:標(biāo)樣木糖組分濃度(mg/ml);V:總稀釋體積(ml);W:樣品重量(ml)。